محققانی که وزیکولهای خارج سلولی (EVs) را مطالعه میکنند، اغلب با چالشهای مربوط به استانداردسازی، تکرارپذیری و حساسیت مواجه هستند. ابزارهای قابل اعتماد و معرف های با کیفیت بالا برای انجام اکتشافات مهم در زمینه پیچیده ارتباطات بین سلولی ضروری هستند.
پلاکت ها، اگرچه قطعات سلولی کوچکی در خون هستند، اما حاوی مواد فعال زیستی غنی هستند و نقش مهمی در تولید اگزوزوم و تنظیم عملکردی دارند. اگزوزومهای مشتق از پلاکت انسانی که با دقت از اهداکنندگان سالم تهیه میشوند، با استفاده از روشهای فیلتراسیون جریان مماسی پیشرفته (TFF) و کروماتوگرافی حذف اندازه (SEC) جدا و خالص میشوند. این اگزوزوم ها خواص بیولوژیکی ذاتی خود را حفظ می کنند، و آنها را برای مطالعه عملکردهای EV، به عنوان کنترل های مثبت و کالیبره کردن روش های تحلیلی ایده آل می کند.
برای به حداکثر رساندن فعالیت و پایداری اگزوزوم، یک فرآیند لیوفیلیزاسیون پیشرفته به طور موثر رطوبت را از بین می برد و عمر ماندگاری را تا 24 ماه افزایش می دهد بدون نیاز به ذخیره سازی سختگیرانه در زنجیره سرد (ذخیره سازی توصیه شده در دمای 4 درجه سانتی گراد). این ثبات طولانی مدت برنامه ریزی تجربی و مدیریت موجودی را ساده می کند و در عین حال دسترسی مداوم به مواد تحقیقاتی با کیفیت بالا را تضمین می کند.
این اگزوزوم های لیوفیلیزه به عنوان کنترل های مثبت قابل اعتماد در تکنیک های تجزیه و تحلیل EV چندگانه عمل می کنند. در زیر دستورالعملهای استفاده توصیه شده است (ممکن است تنظیمات بر اساس شرایط آزمایشی خاص مورد نیاز باشد):
| تکنیک کاربردی | مقدار توصیه شده |
|---|---|
| آنالیز ردیابی نانوذرات فلورسنت (F-NTA) | 1 میکروگرم |
| فلوسیتومتری | 5 میکروگرم |
| الایزا | 10-20 میکروگرم در چاه |
| وسترن بلات | 10-20 میکروگرم در خط |
اولتراسانتریفیوژ و EVهای جدا شده با TFF با استفاده از کیت تشخیص تتراسپانین F-NTA EV رنگآمیزی شدند و با ZetaView® x30 آنالیز شدند و خصوصیات دقیق در مقیاس نانو را نشان دادند. اعتبار سنجی اضافی با استفاده از معرف های تشخیص CD9، CD63 و CD81 F-NTA، الگوهای بیان مارکر خاصی را در EV های مشتق شده از پلاکت تایید کرد.